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超微量分光光度計應用于生命科學的具體領域分析

發布時間: 2021-12-21  點擊次數: 310次
  超微量分光光度計已經成為現代分子生物實驗室常規儀器,主要設計用于生命科學實驗室蛋白質組學和基因組學下述應用領域:
  
  一、核酸的定量
  
  核酸的定量是超微量分光光度計使用頻率高的功能??梢远咳苡诰彌_液的寡核苷酸,單鏈、雙鏈DNA,以及RNA。核酸的吸收峰的吸收波長260nm。每種核酸的分子構成不一,因此其換算系數不同。
  
  定量不同類型的核酸,事先要選擇對應的系數。如:1OD的吸光值分別相當于50μg/ml的dsDNA,37μg/ml的ssDNA,40μg/ml的RNA,30μg/ml的Olig。
  
  測試后的吸光值經過上述系數的換算,從而得出相應的樣品濃度。測試前,選擇正確的程序,輸入原液和稀釋液的體積,爾后測試空白液和樣品液。然而,實驗并非一帆風順。讀數不穩定可能是實驗者頭痛的問題。靈敏度越高的儀器,表現出的吸光值漂移越大。
  
  二、蛋白質的直接定量(UV法)
  
  這種方法是在280nm波長,直接測試蛋白。選擇Warburg公式,超微量分光光度計可以直接顯示出樣品的濃度,或者是選擇相應的換算方法,將吸光值轉換為樣品濃度。
  
  蛋白質測定過程非常簡單,先測試空白液,然后直接測試蛋白質。由于緩沖液中存在一些雜質,一般要消除320nm的“背景”信息,設定此功能“開”。與測試核酸類似,要求A280的吸光值至少大于0.1A,線性范圍在1.0-1.5之間。
  
  三、比色法蛋白質定量
  
  蛋白質通常是多種蛋白質的化合物,比色法測定的基礎是蛋白質構成成分:氨基酸(如酪氨酸,絲氨酸)與外加的顯色基團或者染料反應,產生有色物質。有色物質的濃度與蛋白質反應的氨基酸數目直接相關,從而反應蛋白質濃度。
  
  四、細菌細胞密度
  
  實驗室確定細菌生長密度和生長期,多根據經驗和目測推斷細菌的生長密度。在遇到要求較高的實驗,需要采用超微量分光光度計準確測定細菌細胞密度。細菌細胞密度是追蹤液體培養物中微生物生長的標準方法。
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