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酵母互補實驗的快速檢測方法

發布時間: 2021-10-21  點擊次數: 605次

 酵母,一種體內模式生物,具有很大的優勢。釀酒酵母,芽殖酵母,是一種單細胞真核生物。大多數進程,例如轉錄,翻譯,蛋白質折疊都是保守的,因此酵母是一種非常合適的復雜哺乳動物細胞的替代品。

 

與其他模式生物不同,例如大腸桿菌,酵母沒有毒性,而且能表達完整的膜蛋白。

 

1996年對酵母基因組進行測序后,出現了許多用于基因操作的工具。發明了例如穿梭載體,通過同源重組刪除基因??梢允褂镁哂腥笔Ь甑拇笮臀膸?,輕松設置功能分析。

 

酵母互補試驗,缺失某種蛋白質的酵母突變體,通過轉基因將一個外顯子基因質粒轉入突變體。此時,這株酵母突變體面對一種境況,就是這種缺失掉的蛋白質功能會影響它的存活和生長。如果這種缺失型突變體生長出來了,就意味著這種轉入的外顯子基因補償了這種缺失基因的功能,使得酵母細胞能夠正常存活和生長。有一些方法可以檢測酵母的互補試驗,比如液體測量,尿素測量法,氨測量法,水份測量法等。在此,我們介紹一種方法:計數酵母的方法。

 

CellDrop 明場計數酵母細胞:采用特有的小細胞模式,結合AI算法,準確計算酵母細胞總數。

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不僅如此,采用熒光染料FDA+PI的組合,可以進行酵母細胞的活力檢測

 活性檢測:

     活性檢測即用兩種不同的熒光試劑進行染色。Y20.1細胞,過夜誘導,在明場計數儀下計數5e6 cells/ml. 針對CellDrop 酵母活性分析(DeNovix18ul的細胞懸浮液和1ulFDAPI?;旌衔锉芄庀?/span>15min。10ul的混合物側面peptide入到celldrop中,進入yeast app進行測量。

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   活力檢測中,應用熒光試劑判斷酵母細胞的死活,將檢測時間從5天的尿素檢測或氨檢測時間縮短到了十幾秒。

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    無需一次性或可重復利用的計數板,CellDrop BF/FL做到絕對的無耗材,是新一代計數儀的代表。


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