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超微量分光光度計 | DS-11與核酸定量

發布時間: 2021-10-21  點擊次數: 1352次
核酸定量

核酸(nucleic acid)是含有磷酸基團的重要生物大分子,包括核糖核酸(RNA)和脫氧核糖核酸(DNA)。因最初從細胞核分離獲得,又具有酸性,故稱為核酸。但凡有生命的地方就有核酸存在,即使是比細菌還小的病毒也含有核酸。核酸是生物遺傳信息的載體,是構成基因和表達的物質基礎,是合成蛋白質、組成細胞的重要生理活性物質,支配著生命從誕生到死亡的全過程。



核酸不僅與正常生命活動如生長繁殖、遺傳變異、細胞分化等有密切關系,而且與生命的異?;顒尤缒[瘤發生、輻射損傷、遺傳病、代謝病、病毒感染等也息息相關。因此核酸研究是現代生物化學、生物分子學與醫藥學發展的重要領域,隨著分子生物學的廣泛應用,核酸定量已經成為一種常規化的實驗手段。


核酸定量,包括雙鏈 DNA (dsDNA)、單鏈 DNA (ssDNA) 和 RNA 定量,是生命科學研究中的主要過程,需要在后續實驗之前了解樣品濃度。準確定量核酸濃度對于下一代測序、轉染、PCR 和克隆等下游實驗至關重要。這些實驗通常需要特定范圍的核酸濃度和純度以獲得最佳結果,而濃度的不準確測定會導致較大偏大結果或者測定失敗。


    

DeNovix超微量光度計


Denovix,這一創造無耗材細胞計數神話的偉大pin pai,也曾創造了智能超微量光度計,于2013年,在美國市場正式發布銷售智能型DS-11/11+超微量紫外可見分光光度計,其采用多點斜率技術,自動感應樣品濃度并自動選擇最佳檢測光程技術,成功將超微量帶入智能時代。從獲得SelectScience質量的久負盛名的白金印章,到全球用戶的評價高分,是全球科學家對DS-11產品易用性,服務和價值的充分信任。

作為一款靈敏的智能超微量光度計,DS-11采用SmartPath技術(US9442009B2),可自動感應樣品濃度并調節至最佳檢測光程,對于各種濃度的樣品都具備最高的檢測靈敏度和可靠性,斜率算法確保儀器終生精度,無需校準,堪稱最新一代智能超微量光度計的典范。



文獻分享



Pan等[1]在探究lncRNA JPX/miR-33a-5p/Twist1通過激活Wnt/β-catenin信號調控肺癌的腫瘤發生和轉移這一過程中即需要進行定量RNA以便量化PCR。該研究成果最終發表在雜志MOLCULAR CANCER上,題目為“lncRNA JPX/miR-33a-5p/Twist1 axis regulates tumorigenesis and metastasis of lung cancer by activating Wnt/β-catenin signaling"(2020 Jan 15;19(1):9. doi: 10.1186/s12943-020-1133-9. IF=27.404)

摘要:
背景:MicroRNAs (miRNAs) 和 Twist1 誘導的上皮間質轉化 (EMT) 可促進癌細胞傳播這點已經得到很好的證實,但長鏈非編碼 RNA (lncRNAs) 在 Twist1 介導的信號傳導中的作用尚未可知。

方法:通過RT-qPCR和蛋白質印跡檢測肺癌細胞系和組織中lncRNA JPX和Twist1的表達水平。通過蛋白質印跡、挽救實驗、集落形成試驗、流式細胞術和異種移植動物實驗,研究了 JPX 對肺癌細胞中 Twist1 表達、細胞生長、侵襲、凋亡和體內腫瘤生長的影響。

結果:我們觀察到 lncRNA JPX 在肺癌轉移組織中上調,并且與腫瘤大小和晚期密切相關。在功能上,JPX 在體外促進肺癌細胞增殖并在體內促進肺腫瘤生長。此外,JPX 通過競爭性海綿 miR-33a-5p 上調 Twist1,隨后誘導 EMT 和肺癌細胞侵襲。有趣的是,JPX 和 Twist1 在肺癌組織和細胞中協同上調。在機制上,JPX/miR-33a-5p/Twist1通過激活 Wnt/β-catenin 信號參與 EMT 進程。

結論:這些發現表明 lncRNA JPX 是 Twist1 信號傳導的介質,可使肺癌細胞易于轉移,并可能作為靶向治療的潛在靶點。

作者從肺組織和細胞中分離得到總RNA,用DeNovix DS-11 分光光度計檢測 RNA 的純度和濃度,以進行后續的量化PCR。DeNovix DS-11可檢測到的RNA的下限低至0.60 ng/uL RNA。該設備能檢測RNA濃度的同時也能給出 260/280 和 260/230 比率,直接判斷RNA的純度,若樣品不純會直接給出警告指示。


Tips:A260nm是核酸最高吸收峰的波長,A280是蛋白質和酚類物質最高吸收峰的吸收波長,純DNA的A260/A280=1.8,純RNA的A260/A280=2.0,若<1.8或2.0,則表示樣品受到蛋白質(芳香族)或酚類物質的污染,需純化樣品。

除了RNA,DS-11還能檢測DNA和蛋白質等,檢測下限0.75 ng/uL dsDNA和0.04 mg/mL BSA,上限為37500 ng/uL dsDNA 或 1125 mg/ml BSA 蛋白。紫外-可見分光光度法和熒光法是核酸定量的常用方法,兩者可視為對比且互補的樣品定量方法。

DeNovix超微量光度計結合吸光度和熒光檢測與一身,具備優秀的精確度、靈敏度、特異性和易用性,小巧輕便,方便移動、戶外研究作業。并且擁有多個型號,不同型號擁有不同配置,適用于超廣研究方向和使用者群體。


Denovix超微量主要特點>>


1、主機超微量模式始終如一的精度、終身免校。zhuan li的SmartPath和Bridge testing技術保駕護航。
2、無論是微量模式還是紫外熒光一體式:測量樣品的濃度范圍最寬,上下限均是行業內的翹首。
3、根據樣品濃度不同,自動變換測量光程。受zhuan li保護(US9442009B2)。超微量模式:0.02mm自動變換至0.5mm。
4、污染物分析功能SmartQC,污染物種類鑒定報告。提示污染物,結合熒光模塊檢測。
5、微量模式下,蛋白質濃度無限制準確測量。無需稀釋至比色皿,微量即可檢測高濃度的蛋白質。
6、wei一一款整合了熒光光度計的超微量,非常適用于疫苗生產企業的殘留檢測。



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